ヤヌスグリーンによるミトコンドリアの観察

　ミトコンドリアの語源は，糸を意味するmitと粒を意味するchondrionの合成語である。教科書などの細胞の構造によると，ミトコンドリアは，光学顕微鏡で観察できるオルガネラ（細胞小器官）として紹介されている。しかし，生徒は，教科書や各種資料に掲載された細胞の模式図のイメージにより，かなり大きな楕円体と認識している可能性がある。そこで，実際に観察する機会があると，理解が深まると思われる。
　ミコンドリアの光学顕微鏡による観察法としては，一部の高等学校の教科書にTTC試薬（トリフェニルテトラゾリウムクロライド）による染色法が紹介されているが，古くからヤヌスグリーンによる染色法が知られている。この方法は，ドイツのミカエリスが1900年に考案した。ヤヌスグリーンは，細胞膜を通過して細胞内の構造物を染色することができる。このような染色法は「超生体染色」supravital staining と呼ばれる。
　ヤヌスグリーンによる染色は，TTC試薬による染色よりやや不鮮明だが，非常に簡便な方法である。

(1)　準備

①　材料
　　ヒト口腔上皮細胞（ほおの内側の粘膜細胞），オオカナダモの葉，またはタマネギ鱗片葉の表皮
　　＊オオカナダモの場合，葉緑体との比較ができる。

②　器具
　　観察用：検鏡用具一式，つま楊枝，カミソリの刃，点眼瓶またはポリスポイト
　　試薬調整用：天秤，メスシリンダー，ビーカー，メスフラスコ，駒込ピペット，ガラス棒，薬さじ

③　試薬
　　ヤヌスグリーンB(C30H31N6Cl)，塩化ナトリウム(NaCl)，スクロース(C12H22O11)

　　◆染色液の調整◆
　　　・ヤヌスグリーンB 0.1gを10mLの水に溶かし，１％水溶液を調整する。これを原液とする。
　　　 ＊後に希釈するので少量あれば良い。

Ａ：口腔上皮用
　　①　生理食塩水（0.9％食塩水)を100mL調整する。
　　②　ヤヌスグリーンBの原液（1％水溶液）1mLを，駒込ピペットで生理食塩水100mLに加えて良く撹拌する。
　 　＊ヤヌスグリーンは，塩類溶液に溶けにくいので，水に溶かして１％の原液を作っておく。
　　 ＊0.9％食塩水にヤヌスグリーンB原液を加える操作は，使用時に行う。
　　③　染色液を点眼瓶に入れる。または，小型のビーカーなどに入れ，ポリスポイトで滴下して使用する。

Ｂ：オオカナダモ，タマネギ用
　　①　0.3mol/L（約10.3％）のスクロース水溶液を100mL調整する。
　　②　ヤヌスグリーンBの原液（1％水溶液）1mLを，駒込ピペットでス0.3mol/Lクロース水溶液100mLに加える。
　　③　染色液を点眼瓶に入れる。または，小型のビーカーなどに入れ，ポリスポイトで滴下して使用する。

(2)　方法

①　つま楊枝の頭の丸い部分で，ほおの内側から，口腔内粘膜を軽くこすり取りスライドグラスに付着させる。

②　①の試料が乾燥しないうちに，ヤヌスグリーン染色液（Ａ）を滴下する。

③　オオカナダモの葉を１枚取り，スライドガラスに載せる。
　　 または，タマネギの鱗片葉の場合，カミソリの刃で表皮を切り取り，スライドガラスに載せる。

④　③の試料にヤヌスグリーン染色液（Ｂ）を滴下する。

⑤　②，④を10～15分間放置する。

⑥　⑤それぞれにカバーグラスをのせた後，400倍以上で検鏡する。
　　＊口腔内上皮の場合，しばしば口内の細菌類が観察される。
　　　その場合，ピント調節を丁寧に行い，細胞の外側にあることを見極める。
　　＊タマネギの場合は，600倍以上で観察した方が良い。

ヤヌスグリーンで染色したヒト口腔上皮細胞	〇印内は，口内の細菌類 （ピントの位置から細胞の上にあることがわかる）
ヤヌスグリーンで染色したオオカナダモの葉	ヤヌスグリーンで染色したタマネギ鱗片用表皮細胞
《参考》TTC試薬で染色したオオカナダモの葉	《参考》TTC試薬で染色したタマネギ鱗片用表皮細胞

　^{岩手県立総合教育センター理科教育担当 2016}